基于原核及哺乳动物细胞两大系统,提供从基因到蛋白的一站式服务,最终产品可用于动物实验、结构分析、扩大培养等。
通过基因克隆技术,将外源目的基因,通过构建表达载体并导入表达菌株的方法,使其在特定原核生物或细胞内表达。原核表达系统用于表达重组蛋白有以下优点:易于生长和控制;易于培养,实验耗费少;可选择多种大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒。
1. E. coli表 达菌株筛选
质粒扩增
转化并挑选阳性克隆
SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况,并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的 表达。
可提供表达菌株:DH5α, Top10, BL21 (DE3)
提供客户:重组质粒的表达菌株及表达检测报告
服务周期:1周
2. 目标蛋白表达及纯化(小试)
摇瓶培养1L重组细菌,诱导表达目标蛋白。
通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白
蛋白鉴定:SDS-PAGE、HPLC-SEC、WB、Biacore Affinity、吸收光谱检测 、内毒素检测
提供客户:纯化好的目标蛋白5~10mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签(Tag)或切
除纯化标签(Tag)的最终蛋白,纯度最高可达90%以上
服务周期:3-6周
3. 大规模制备
大型摇床,一次性可以培养4L重组细菌
10L细菌发酵罐规模
提供客户:合格的目标蛋白及服务报告
服务周期:面谈
由于应用于该领域的重组蛋白基本上均需要翻译后修饰,以获得与天然分子相同的生物活性,而哺乳动物细胞自身具备蛋白折叠和翻译后修饰的功能,因此很多客户选择哺乳动物细胞蛋白表达系统,表达高质量的重组蛋白。
1. 重组蛋白瞬时表达服务 (HEK293 或CHO细胞)
制备可用于转染哺乳动物细胞的质料
哺乳动物细胞瞬时转染,可实现无血清培养,重组蛋白表达评估和条件优化
小规模蛋白表达和纯化
(500 ml-1000mL培养物)
大规模蛋白表达和纯化
(5L无血清培养,瞬时表达,5-20mg/L表达量)(可选)
蛋白鉴定:SDS-PAGE、HPLC-SEC、WB、Biacore Affinity、吸收光谱检测、内毒素检测
提供客户:合格的目标蛋白以及服务报告
服务周期:3-8周
2. 重组蛋白稳定表达细胞株的构建和蛋白表达纯化服务 (CHO 细胞)
制备可用于转染哺乳动物细胞的质粒
哺乳动物细胞转染,筛选稳定转染的细胞
单克隆筛选(可选)和重组蛋白表达评估
无血清悬浮驯化
细胞库建立
小规模蛋白表达和纯化
(500 ml-2L培养物)(可选)
大规模蛋白表达和纯化
(10L-50L,可选)
蛋白鉴定:SDS-PAGE、HPLC-SEC、WB、Biacore Affinity、吸收光谱检测、内毒素检测
提供客户:合格的目标蛋白以及服务报告
服务周期:面谈